一、官方標準體積參數
1.標準DynePlate專用96孔板
Kibron Delta‑8配套一次性DynePlate聚丙烯微孔板,儀器標稱標準測量體積50 μL/孔,為儀器出廠標定、方法開發、CMC測定、高通量篩選的推薦終體積。該體積經過探針浸入深度、液麵高度算法匹配,保證DyneProbe八通道探針可以正確浸入液麵,獲得可靠表麵張力讀數。
2.允許浮動區間
實際實驗可浮動範圍40‑60 μL每孔。
低於40 μL,液麵高度不足,探針無法可靠浸入,容易出現測值丟失、數據跳變、報探針未接觸液麵。
高於60 μL,液麵過高,探針浸入過深,容易發生孔間液體交叉沾染;振動或者板位移動時液體容易濺出,同時會改變探針受力,帶來係統偏移。不允許超過60 μL。
二、不同實驗場景體積選擇
1.常規高通量篩選、CMC測定、濃度梯度實驗
優先固定50 μL每孔。梯度稀釋直接在板內完成,定容至50 μL,保證所有孔體積完全一致,消除液麵高度帶來的係統誤差。加樣完成後使用透明封板膜封板,減少溶劑揮發;上機前小心撕掉封板膜,避免膜碎屑掉入孔內。
2.含易揮發溶劑、長時間靜置動力學測試
優先選用55‑60 μL,補償揮發損耗。不建議大於60 μL。同時縮短板放置到上機的等待時間,減少體積變化帶來的偏差。
3.高粘度、易起泡樣品
控製在45‑50 μL。體積偏大容易產生氣泡,氣泡會直接破壞測量,出現大量無效數據。加樣時沿孔壁緩慢加入,避免衝擊產生氣泡。出現氣泡的孔需要棄掉重新配製。
三、操作關鍵注意事項
1.整板所有孔盡量保持體積一致,同一塊板最大體積差不超過±5 μL。孔與孔體積差異會帶來液麵高度不一致,八通道探針浸入深度相對改變,造成行與行之間係統偏差。
2.不可以使用普通商用96孔板隨意替換DynePlate板。普通96孔板孔底高度、孔深度不一樣,即使加入50 μL液體,實際液麵高度和原裝DynePlate板不一致,會導致探針浸入異常。
3.邊緣孔揮發效應明顯,即便體積加樣準確,長時間放置後邊緣孔實際體積會下降,建議加樣後盡快上機;需要孵育時務必封板。
4.移液槍需要校準,低體積移液建議使用多通道移液槍,減少每孔加樣體積離散。
四、體積異常帶來的典型故障現象
體積過低:大量孔數據缺失、探針接觸報警、表麵張力數值整體偏高,平行樣RSD顯著變大。
體積過高:孔間串液、液體濺到板表麵、測值係統性偏低,出現無規律異常點。
孔間體積不均:同一板內相同樣品,不同行讀數出現係統性偏移。
